四級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室要求規(guī)范     上海

按照BSL-4標(biāo)準(zhǔn)建造的實(shí)驗(yàn)室，也稱為高度實(shí)驗(yàn)室生物安全。實(shí)驗(yàn)室為獨(dú)立的建筑物，或在建筑物內(nèi)一切其它區(qū)域相隔離的可控制的區(qū)域。為防止微生物傳播和污染環(huán)境，BSL-4實(shí)驗(yàn)室必須實(shí)施特殊的設(shè)計(jì)和工藝。在此沒有提到的BSL-3要求的各條款在BSL-4中都應(yīng)做到。其具體的標(biāo)準(zhǔn)微生物操作、特殊操作、安全設(shè)備和實(shí)驗(yàn)室設(shè)施要求如下：

4.1標(biāo)準(zhǔn)操作

（1）限制進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的人員數(shù)量。

（2）制定安全操作利器的規(guī)程。

（3）減少或避免氣溶膠發(fā)生。

（4）工作臺(tái)面每天至少消毒一次，任何濺出物都要及時(shí)消毒。

（5）一切廢棄物在處理前要高壓滅菌。

（6）昆蟲和嚙齒類動(dòng)物控制按有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

（7）嚴(yán)格控制菌、毒種（見前）。

4.2特殊操作

（1）人員進(jìn)入

只有工作需要的人員和設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)需要的人員經(jīng)過系統(tǒng)的生物安全培訓(xùn)，并經(jīng)過批準(zhǔn)后方能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。負(fù)責(zé)人或監(jiān)督人有責(zé)任慎重處理每一個(gè)情況，確定進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作的人員。采用門禁系統(tǒng)限制人員進(jìn)入。進(jìn)入人員由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、安全控制員管理。人員進(jìn)入前要告知他們潛在的生物危險(xiǎn)，教會(huì)他們使用安全裝置。工作人員要遵守實(shí)驗(yàn)室進(jìn)出程序。制定應(yīng)對緊急事件切實(shí)可行的對策和預(yù)案。

（2）危害警告

當(dāng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有傳染性材料或感染動(dòng)物時(shí)，在所有的入口門上展示危險(xiǎn)標(biāo)志和普遍防御信號(hào)，說明微生物的種類、實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和其他責(zé)任人的名單和進(jìn)入此區(qū)域特殊的要求。

（3）負(fù)責(zé)人職責(zé)

實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人有責(zé)任保證，在BSL-4內(nèi)工作之前，所有工作人員已經(jīng)高度熟練掌握標(biāo)準(zhǔn)微生物操作技術(shù)、特殊操作和設(shè)施運(yùn)轉(zhuǎn)的特殊技能。這包括實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和具有豐富的安全微生物操作和工作經(jīng)驗(yàn)專家培訓(xùn)時(shí)所的內(nèi)容和安全委員會(huì)的要求。

（4）免疫接種

工作人員要接受試驗(yàn)病原體或?qū)嶒?yàn)室內(nèi)潛在病原微生物的免疫注射。

（a）血清學(xué)監(jiān)督：對實(shí)驗(yàn)室所有工作人員和其他有感染危險(xiǎn)的人員采集本底血清并保存，再根據(jù)操作情況和實(shí)驗(yàn)室功能不定期血樣采集。進(jìn)行血清學(xué)監(jiān)督。對致病微生物抗體評(píng)價(jià)方法要注意適用性。項(xiàng)目進(jìn)行中，要保證每個(gè)階段血清樣本的檢測，并把結(jié)果通知本人。

（b）安全手冊：制定生物安全手冊。告知工作人員特殊的生物危險(xiǎn)，要求他們認(rèn)真閱讀并在實(shí)際工作當(dāng)中嚴(yán)格執(zhí)行。

（c）技術(shù)培訓(xùn)：工作人員必須經(jīng)過操作zui危險(xiǎn)病原微生物的培訓(xùn)，建立普遍防御意識(shí)，學(xué)會(huì)對暴露危害的評(píng)價(jià)方法，學(xué)習(xí)物理防護(hù)設(shè)備和設(shè)施的設(shè)計(jì)原理和特點(diǎn)。每年訓(xùn)練一次，規(guī)程一旦修改要增加訓(xùn)練次數(shù)。由對這些病原微生物工作受過嚴(yán)格訓(xùn)練和具有豐富工作經(jīng)驗(yàn)的專家或安全委員會(huì)指導(dǎo)、監(jiān)督進(jìn)行工作。

（d）緊急通道只有在緊急情況下才能經(jīng)過氣閘門進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)要有緊急通道的明顯標(biāo)識(shí)。

（e）在安全柜型實(shí)驗(yàn)室中，工作人員的衣服在外更衣室脫下保存。穿上全套的實(shí)驗(yàn)服裝（包括外衣、褲子、內(nèi)衣或者連衣褲、鞋、手套）后進(jìn)入。在離開實(shí)驗(yàn)室進(jìn)入淋浴間之前，在內(nèi)更衣室脫下實(shí)驗(yàn)服裝。服裝洗前應(yīng)高壓滅菌。在防護(hù)服型實(shí)驗(yàn)室中，工作人員必須穿正壓防護(hù)服方可進(jìn)入。離開時(shí)，必須進(jìn)入消毒淋浴間消毒。

（f）實(shí)驗(yàn)材料和用品要通過雙扉高壓滅菌器、熏蒸消毒室或傳遞窗送入，每次使用前后對這些傳遞室進(jìn)行適當(dāng)消毒。

（g）對利器，包括針頭、注射器、玻璃片、吸管、毛吸管和解剖刀，必須采取高度有效的防范措施。盡量不使用針頭、注射器和其它銳利的器具。只有在必要時(shí)，如實(shí)質(zhì)器官的注射、靜脈切開或從動(dòng)物體內(nèi)和瓶子里吸取液體時(shí)才能使用，盡量用塑料制品玻璃制品。在注射和抽取傳染性材料時(shí)，只能使用鎖定針頭的或一次性的注射器（針頭與注射器一體的）。使用過的針頭在處理之前，不能折彎、折斷、破損，要精心操作，不要蓋上原來的針頭帽；放在固定方便且不會(huì)刺破的用于處理利器的容器里。不能處理的利器，必須放在器壁堅(jiān)硬的容器內(nèi)，運(yùn)輸?shù)较緟^(qū)，高壓消毒滅菌?？梢允褂锰坠茚樄芎吞坠茚橆^、無針頭注射器和其它安全器具。破損的玻璃不能用手直接操作，必須用機(jī)械的方法清除，如刷子、簸萁、夾子和鑷子。盛污染針頭、銳利器具、碎玻璃等，在處理前一律消毒，消毒后處理按照國家或地方的有關(guān)規(guī)定實(shí)施。

（h）從BSL-4拿出活的或原封不動(dòng)的材料時(shí)，先將其放在堅(jiān)固密封的容器內(nèi)，再密封在不能破損的二級(jí)容器里，經(jīng)過消毒劑浸泡或消毒熏蒸后通過氣閘取出。

（i）除活體或原封不動(dòng)的生物材料以外的物品，除非經(jīng)過消毒滅菌，否則不能從BSL-4拿出。不耐高熱和蒸汽的器具物品可在消毒通道或小室內(nèi)用熏蒸消毒。

（j）完成傳染性材料工作之后，特別是有傳染性材料溢出、濺出或污染時(shí)，都要嚴(yán)格地滅菌。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)儀器要進(jìn)行常規(guī)消毒。

（k）傳染性材料濺出的消毒清潔工作，由適宜的人員進(jìn)行。并將事故的經(jīng)過在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)公示。

（l）建立報(bào)告實(shí)驗(yàn)室暴露事故、雇員缺勤制度和系統(tǒng)，以便對與實(shí)驗(yàn)室潛在危險(xiǎn)相關(guān)的疾病進(jìn)行醫(yī)學(xué)監(jiān)督。對該系統(tǒng)要建造一個(gè)病房或觀察室，以便需要時(shí)，檢疫、隔離、治療與實(shí)驗(yàn)室相關(guān)的病人。

（m）與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品（植物、動(dòng)物和衣物）不許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

4.3安全設(shè)備（初級(jí)防護(hù)屏障）

在設(shè)施污染和半污染工作區(qū)域內(nèi)的一切操作都應(yīng)在Ⅲ級(jí)生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。如工作人員穿著具有生命支持通風(fēng)系統(tǒng)的正壓防護(hù)服，可在Ⅱ級(jí)生物安全柜內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

4.4實(shí)驗(yàn)室設(shè)施（次級(jí)防護(hù)屏障）

BSL-4實(shí)驗(yàn)室有兩種類型：安全柜型，即所原微生物的操作均在Ⅲ級(jí)生物安全柜內(nèi)或隔離器進(jìn)行；防護(hù)服型，即工作人員穿正壓防護(hù)服工作，操作可在Ⅱ級(jí)生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。也可以在同一設(shè)施內(nèi)穿正壓防護(hù)服，并使用Ⅲ級(jí)生物安全柜。

（1）安全柜型

BSL-4建筑物或獨(dú)立，或在系統(tǒng)建筑中由一個(gè)清潔區(qū)或隔墻把它與其它區(qū)域隔離開。中心實(shí)驗(yàn)室（污染區(qū)）裝有Ⅲ級(jí)生物安全柜，實(shí)驗(yàn)室周圍為足夠?qū)挼母綦x帶，如環(huán)形走廊（半污染區(qū)）。從隔離帶進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室必須通過一個(gè)緩沖間。在污染區(qū)和半污染區(qū)之間，安裝兩臺(tái)以上生物安全型高壓蒸汽滅菌器（一次滅菌），互為備用。外更衣室（清潔區(qū)）與內(nèi)更衣室（半污染區(qū)）由淋浴間（清潔區(qū)）隔開，人員進(jìn)出經(jīng)過淋浴間。在清潔區(qū)與半污染區(qū)之間設(shè)置一個(gè)通風(fēng)的雙門傳遞通道，為不可通過更衣室進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)用品或儀器通過物理屏障時(shí)通道和消毒。在清潔區(qū)與半污染區(qū)之間同樣安置一臺(tái)生物安全型高壓滅菌器，用于二次消。每天工作開始之前，檢查所有物理防護(hù)參數(shù)（如壓差）。

實(shí)驗(yàn)區(qū)的墻、地和天棚整體密封，便于熏蒸消毒。內(nèi)表面耐水和化學(xué)制劑、便于消毒。實(shí)驗(yàn)區(qū)任何液體必須排放到有消毒裝置的儲(chǔ)液罐，經(jīng)過有效滅菌達(dá)標(biāo)排放。通風(fēng)口和在線管道都要安裝HEPA過濾器。工作臺(tái)面不滲水，耐中等熱、有機(jī)溶劑、酸、堿和常用消毒劑的腐蝕。

實(shí)驗(yàn)室用具事先設(shè)計(jì)，便于安放穩(wěn)妥和使用，彼此留有一定空間便于清潔衛(wèi)生，桌椅表面易于消毒。內(nèi)外更衣室和實(shí)驗(yàn)室進(jìn)出門附近安裝非手動(dòng)或自動(dòng)開關(guān)的洗手池。排風(fēng)經(jīng)過2個(gè)串連的HEPA過濾，送、排風(fēng)過濾器安裝應(yīng)便于消毒和更換。供水、供均安裝防止回流的裝置加以保護(hù)。如果水源（消防噴槍），其開關(guān)應(yīng)該是安裝在實(shí)驗(yàn)室外面走廊里，開關(guān)自動(dòng)或非手動(dòng)。此系統(tǒng)與實(shí)驗(yàn)室區(qū)域供水分配系統(tǒng)分開，配備防止回流裝置。實(shí)驗(yàn)室進(jìn)出門自動(dòng)鎖閉。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有窗戶都必須是封閉窗。從Ⅲ級(jí)安全柜和實(shí)驗(yàn)室傳出的材料必須經(jīng)雙扉高壓滅菌器滅菌。滅菌器與周圍物理屏障的墻之間要密封。滅菌器的門自動(dòng)連鎖控制，以保證只有在滅菌過程全部完成后才能開啟外門。從Ⅲ級(jí)安全柜或?qū)嶒?yàn)室內(nèi)要拿出的材料和儀器，不能用高壓滅菌消毒的要通過液體浸泡消體熏蒸消毒或同等效果的消毒裝置進(jìn)行消毒和傳遞。來自內(nèi)更衣室（包括廁所）和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的洗手、地漏、高壓滅菌器的廢水以及其它廢水，在排入公共下水之前，都要使用可靠的方法消毒（熱處理比較合適）。淋浴和清潔區(qū)一側(cè)廁所的廢水不需特殊處理就可排入公共下水。所用廢水消毒方法必須具有物理學(xué)和生物學(xué)的監(jiān)測措施和法規(guī)確認(rèn)。

非循環(huán)的負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)，供、排風(fēng)系統(tǒng)應(yīng)采用壓力無關(guān)裝置保持動(dòng)態(tài)平衡，保證流從zui低危險(xiǎn)區(qū)向zui高危險(xiǎn)區(qū)的方向流動(dòng)。對相鄰區(qū)域的壓差或流方向進(jìn)行監(jiān)測，能進(jìn)行系統(tǒng)聲光報(bào)警。應(yīng)安裝一套能指示和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室壓差、適用而可視的氣壓監(jiān)測裝置，其顯示部分安裝在外更衣室的處。Ⅲ級(jí)生物安全柜與排風(fēng)系統(tǒng)相連。

實(shí)驗(yàn)室的供排氣都要經(jīng)過HEPA過濾。為了縮短工作管道潛在的污染，HEPA盡可能安裝在靠近工作的地方。所有HEPA每年均須檢測一次，同時(shí)在靠近HEPA的地方應(yīng)安裝零泄露氣密閥，便于過濾器安裝與消毒更換。HEPA上游安裝預(yù)過濾器可延長其使用壽命。

安全柜型生物安全水平Ⅳ級(jí)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)和操作程序是指令性的。實(shí)驗(yàn)室必須經(jīng)過檢測、鑒定和驗(yàn)收。只有合乎設(shè)計(jì)要求和運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)的才能啟用。實(shí)驗(yàn)室的驗(yàn)收或年檢應(yīng)參考ISO10648標(biāo)準(zhǔn)檢測方法進(jìn)行密封性測試，其檢測壓力不低于500Pa，半小時(shí)的小時(shí)泄漏率不過10%，以保證維護(hù)結(jié)構(gòu)的可靠性。實(shí)驗(yàn)室每年必須檢測一次，確認(rèn)合乎設(shè)計(jì)和運(yùn)行參數(shù)的要求，才能繼續(xù)運(yùn)行。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外應(yīng)有適合的通訊設(shè)施（、傳真、計(jì)算機(jī)等），進(jìn)行無紙化操作。

（2）防護(hù)服型

BSL-4建筑物獨(dú)立，或在系統(tǒng)建筑中由一個(gè)清潔區(qū)或隔墻把它與建筑物其它區(qū)域隔開。實(shí)驗(yàn)室房間的安排與安全柜型基本相同。不同的是在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室（可用Ⅱ級(jí)生物安全柜Ⅲ級(jí)生物安全柜）之前要穿上有生命支持系統(tǒng)的正壓防護(hù)服。生命支持系統(tǒng)所供氣體應(yīng)滿足可呼吸空氣生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)應(yīng)增加緊急排風(fēng)設(shè)施及配有備用電源。進(jìn)入BSL-4實(shí)驗(yàn)室之前要設(shè)置一個(gè)更衣和消毒區(qū)（設(shè)在實(shí)驗(yàn)室的一角或環(huán)形走廊內(nèi)側(cè)）。工作人員離開此區(qū)之前應(yīng)在消毒室對防護(hù)服表面進(jìn)行藥物噴淋和熏蒸，時(shí)間不短于5分鐘。備用電源，在停電時(shí)應(yīng)能夠保證排風(fēng)、生命支持系統(tǒng)、警鈴、燈光、進(jìn)出控制和生物安全柜的應(yīng)急工作。所有通向?qū)嶒?yàn)區(qū)、消毒淋浴室、氣閘的空隙都要封閉。每天實(shí)驗(yàn)開始之前，要完成對所有物理防護(hù)參數(shù)（如壓差等）和正壓防護(hù)服的檢測，以保證實(shí)驗(yàn)室安全運(yùn)行。在實(shí)驗(yàn)區(qū)跨墻安裝雙扉高壓滅菌器，對從實(shí)驗(yàn)區(qū)拿出的廢棄物進(jìn)行一次消毒。高壓滅菌器與物理防護(hù)的壁板間要密閉。

設(shè)置渡槽、熏蒸消毒傳遞小室（柜），供不能通過更衣室進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)的實(shí)驗(yàn)材料、用品或儀器的消毒和傳遞使用。這些設(shè)施還能用于不能高壓的材料、用品和儀器安全地取出。在清潔區(qū)與半污染區(qū)之間同樣安置一臺(tái)雙扉生物安全型高壓滅菌器，用于二次消毒。實(shí)驗(yàn)區(qū)的墻、地和天棚整體密封，便于熏蒸消毒。內(nèi)表面耐水和化學(xué)制劑、便于消毒。實(shí)驗(yàn)區(qū)任何液體必須排放到有消毒裝置的儲(chǔ)液罐，經(jīng)過有效滅菌達(dá)標(biāo)排放。通風(fēng)口和在線管道都要安裝HEPA過濾器。實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)部附屬設(shè)施，如燈的固定、空氣管道、功能管道等的安排盡可能減少水平表面面積。工作臺(tái)面不滲水，中等耐熱、抗有機(jī)溶劑、酸、堿和常用消毒劑的腐蝕。

實(shí)驗(yàn)用具要簡單、分體、適用、牢固，不選用多孔材料。桌、柜、儀器之間保持一定空間，便于清潔和消毒。實(shí)驗(yàn)用椅和其它用具的表面應(yīng)易于消毒。實(shí)驗(yàn)區(qū)、內(nèi)外更衣室的洗手池設(shè)非手動(dòng)開關(guān)。中央真空系統(tǒng)設(shè)在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)，在線HEPA過濾器靠近每一個(gè)使用點(diǎn)或開關(guān)。過濾器安裝便于消毒和更換。其它進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)的供水、供氣由防止回流裝置加以控制。

實(shí)驗(yàn)區(qū)的門采用門禁系統(tǒng)。消毒淋浴、氣閘室的內(nèi)外門連鎖。來自污染區(qū)內(nèi)的洗手池、地漏、滅菌器和其它來源的廢水必須排放到有消毒裝置的儲(chǔ)液罐，經(jīng)過有效滅菌達(dá)標(biāo)排放。來自淋浴和廁所的廢水經(jīng)處理后排入下水道。所用的廢水消毒方法的效果要有物理學(xué)和生物學(xué)的證據(jù)。

風(fēng)通風(fēng)系統(tǒng)。供、排風(fēng)系統(tǒng)應(yīng)采用壓力無關(guān)裝置保持動(dòng)態(tài)平衡，保證氣流從zui低危險(xiǎn)區(qū)向zui高危險(xiǎn)區(qū)的流動(dòng)。對相鄰區(qū)域的壓差或氣流方向進(jìn)行監(jiān)測，能進(jìn)行系統(tǒng)聲光報(bào)警。應(yīng)安裝一套能指示和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室壓差、適用而可視的氣壓監(jiān)測裝置，其顯示部分安裝在外更衣室的處。

實(shí)驗(yàn)區(qū)的供氣要通過一個(gè)HEPA過濾處理，排氣要通過串連的2個(gè)HEPA過濾處理?？諝庀蚋呖张欧?，遠(yuǎn)離進(jìn)氣口。為了縮短工作管道潛在的污染，HEPA盡可能安裝在靠近工作的地方。所有HEPA每年均須檢測一次，同時(shí)在靠近HEPA的地方應(yīng)安裝零泄露氣密閥，便于過濾器安裝與消毒更換。HEPA上游安裝預(yù)過濾器可延長其使用壽命。

防護(hù)服型生物安全Ⅳ級(jí)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和運(yùn)轉(zhuǎn)要求是指令性的。實(shí)驗(yàn)室必須經(jīng)過檢測、鑒定和驗(yàn)收。只有合乎設(shè)計(jì)要求和運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)的才能啟用。實(shí)驗(yàn)室的驗(yàn)收或年檢應(yīng)參考ISO10648標(biāo)準(zhǔn)檢測方法進(jìn)行密封性測試，其檢測壓力不低于500Pa，半小時(shí)內(nèi)的小時(shí)泄漏率不過10%，以保證維護(hù)結(jié)構(gòu)的可靠性。實(shí)驗(yàn)室每年必須檢測一次，確認(rèn)合乎設(shè)計(jì)和運(yùn)行參數(shù)的要求，才能繼續(xù)運(yùn)行。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外應(yīng)有適合的通訊設(shè)施（、傳真、計(jì)算機(jī)等），進(jìn)行無紙化操作。